4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS:200422-18-0

Účinek: ONPG je substrát specificky používaný k detekci přítomnosti a aktivity enzymu β-galaktosidázy.Když je enzym β-galaktosidáza přítomen a aktivní, štěpí ONPG na dva produkty: o-nitrofenol a derivát galaktózy.Uvolnění o-nitrofenolu má za následek změnu žluté barvy, kterou lze měřit pomocí spektrofotometru.

Aplikace: ONPG má několik aplikací ve výzkumu molekulární biologie a biochemie:

Stanovení aktivity β-galaktosidázy: ONPG se běžně používá k měření a kvantifikaci aktivity enzymu β-galaktosidázy.Rychlost tvorby o-nitrofenolu, která je přímo úměrná aktivitě enzymu, lze měřit spektrofotometricky.

Genová exprese a regulace: ONPG se často používá v experimentech souvisejících se studiemi genové exprese a regulace.Často se používá v testech fúzních proteinů, jako je běžně používaný fúzní systém lacZ, ke studiu exprese genů pod kontrolou specifických promotorů.Aktivita beta-galaktosidázy měřená pomocí ONPG poskytuje pohled na úroveň genové exprese.

Screening aktivity β-galaktosidázy: ONPG lze použít jako kolorimetrickou metodu screeningu v technologii rekombinantní DNA k identifikaci přítomnosti a funkčnosti genu LacZ, který kóduje β-galaktosidázu.Tato metoda screeningu pomáhá při identifikaci klonů, které obsahují požadovaný gen.

Studie kinetiky enzymu: ONPG je také užitečný při studiu kinetiky enzymu β-galaktosidázy.Měřením rychlosti reakce enzym-substrát při různých koncentracích substrátu je možné určit kinetické parametry, jako jsou Michaelis-Mentenovy konstanty (Km) a maximální reakční rychlosti (Vmax).