4-Nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS: 200422-18-0

Účinek: ONPG je substrát konkrétně používaný k detekci přítomnosti a aktivity enzymu β-galaktosidázy. Pokud je enzym β-galaktosidáza přítomen a aktivní, štěpí ONPG na dva produkty: o-nitrofenol a derivát galaktózy. Uvolnění o-nitrofenolu má za následek žlutou změnu barvy, kterou lze měřit spektrofotometrem.

Použití: ONPG má několik aplikací v molekulárně-biologickém a biochemickém výzkumu:

Stanovení aktivity β-galaktosidázy: ONPG se běžně používá k měření a kvantifikaci aktivity enzymu β-galaktosidázy. Rychlost tvorby o-nitrofenolu, která je přímo úměrná aktivitě enzymu, lze měřit spektrofotometricky.

Genová exprese a regulace: ONPG se často používá v experimentech souvisejících se studiemi genové exprese a regulace. Často se používá v testech fúzních proteinů, jako je běžně používaný fúzní systém lacZ, ke studiu exprese genů pod kontrolou specifických promotorů. Aktivita beta-galaktosidázy měřená pomocí ONPG poskytuje vhled do úrovně genové exprese.

Screening aktivity β-galaktosidázy: ONPG lze použít jako kolorimetrickou screeningovou metodu v technologii rekombinantní DNA k identifikaci přítomnosti a funkčnosti genu LacZ, který kóduje β-galaktosidázu. Tato screeningová metoda pomáhá identifikovat klony, které obsahují sledovaný gen.

Studie kinetiky enzymů: ONPG je také užitečný při studiu kinetiky enzymu β-galaktosidázy. Měřením rychlosti reakce enzym-substrát při různých koncentracích substrátu je možné stanovit kinetické parametry, jako jsou Michaelisovy-Mentenovy konstanty (Km) a maximální reakční rychlosti (Vmax).